TRIzol有无毒性，经呼吸道吸入有何影响

博凌科为中量全血基因组DNA提取试剂盒（3ml)根据全血特点采用几个快速步骤提取基因组DNA。首先红细胞裂解液裂解去除不含DNA的红细胞，细胞核裂解液裂解白细胞释放出基因组DNA, 然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。

试剂盒特点

◆ 从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方，裂解快速完全。

◆ 不需要使用有毒的苯酚等试剂。

◆ 快速，简捷，单个样品操作一般可在1小时内完成。

◆ 结果稳定，产量高（典型的产量3ml全血可提取出75-150μg），纯度达1.7～1.9，长度可达50Kb-150kb，可直接用于构建文库，PCR、Southern-blot和各种酶切反应。

试剂盒组成保存 20次 50次

（DP2101）（DP21002）

红细胞裂解液 室温 200 ml500 ml

细胞核裂解液 室温 65 ml160 ml

蛋白沉淀液室温 22 ml 50 ml

DNA溶解液室温 10 ml 20 ml

本试剂盒在室温储存18个月不影响使用效果。

我现在提供一些资料给您参考一下，希望能帮助到您好；

填补Qiagen空白植物RNA提取试剂盒

一般公司多糖多酚植物RNA提取试剂盒失败原因和解决方案

很多植物RNA的样品由于含有大量的多糖、多酚、代谢产物、色素等成分，造成RNA提取过程中氧化、褐化、降解、由于植物品种的多样性造成情况更加复杂。手工的CTAB类的方法提取因为时间太长，太繁琐，手工方法不在讨论之列。一直以来没有一款好的试剂盒包括qiagen、promega等进口试剂盒也无法满足科研工作者对植物RNA提取的要求。

下面我们来分析一下植物RNA为什么不能提取成功的原因：

市面上最常见的RNA提取试剂盒无非是两种：第一种：TRIzol改良类方法（包括溶液型的和离心柱型的）、第二种：直接裂解过柱子的方法（离心柱）

第一种试剂盒失败的原因1：RNA市面上面最流行的方法就是TRIzol，或者TRIzol改良，或者TRIzol加离心柱一类的改良方法。TRIzol也就是异硫氰酸胍/苯酚/氯仿原理一步法的方法最适合的对象是动物源性的组织细胞，针对普通多糖多酚低的植物性的材料，TRIzol类原理产品也可以提取。但是多糖、多酚、次级代谢产物丰富的情况下，TRIzol类方法无法防止多糖多酚对于RNA/DNA分相的干扰，要么残留大量DNA，要么残留大量多糖、多酚或者次级代谢产物，氧化破坏RNA，或者残留这些多糖多酚，色素代谢产物等抑制下游的反转录等反应。限于技术水平的限制，市面上绝大多数的国产厂家是使用TRIzol的方法进行改良，无论是不是加了离心柱。但是实践证明，改良不能从根本上解决问题。判断是否试剂盒使用这种改良的方法非常简单：是否裂解液含有苯酚的味道和使用氯仿，如果使用到了氯仿就是TRIzol方法的改良。

第二种试剂盒失败的原因：直接裂解过柱子的方法是目前最先进的方法，但是也是技术含量最高的方法。这个方法采用裂解液（不含苯酚，氯仿）直接裂解，RNA/DNA同时过柱子，然后在柱子上面直接分离RNA/DNA，所以，这种方法的优点第一在于，避免了使用trizol在多糖多酚下不能成功分离RNA/DNA的弊端、第二在于，不使用有毒的苯酚氯仿。但是正是因为其技术先进，所以难度很高，国内厂家包括进口公司有两个技术难点一直没有突破。第一，裂解液的成分必须针对去除多糖多酚进行研发添加去多糖多酚，代谢产物成分。否则会同样碰到多糖多酚干扰提取的问题。第二、和TRIzol原理不同，直接过柱法DNA/RNA同时加到吸附柱上去。如何去除DNA是第一个难点。否则会残留大量DNA。两个技术难点的没有掌握导致了国内公司包括的第二种试剂盒失败。国外公司因为没有掌握第一难点，裂解液里面没有去除多糖多酚成分，所以包括Qiagen的RNeasy plant mini kit盒子也常常不能成功提取较复杂植物RNA样品如黑加仑、冬青等植物样品。

北京艾德莱生物的研发人员经过3年的不断研发改良，针对多糖多酚植物的特点，和这两种试剂盒失败的原因，开发出了世界领先水平的RN09 EASYspin植物RNA快速提取试剂盒，第一：采用直接过柱子方法，彻底抛弃了TRIzol苯酚，氯仿原理方法，使用无毒原料，并且添加了有自主知识产权的去除多糖多酚成分解决了多糖多酚和代谢产物对于RNA的破坏和干扰分离。第二：突破了直接过柱子的方法DNA去除的技术难点，解决了DNA残留过多问题。

将分散好的真核生物组织、细胞在含SDS和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质。破坏细胞膜、核膜，SDS可使组织蛋白与DNA分子分离，EDTA能抑制细胞中DNase的活性，使DNA分子完整地以可溶形式存在于溶液中，再用酚、氯仿/异戊醇抽提除去蛋白质，（氯仿可除去DNA溶液中微量酚的污染，异戊醇还可减少蛋白质变性操作过程中产生气泡）得到的DNA溶液经乙醇沉淀进一步纯化，为获得高纯度DNA，操作中常加入RNase除去RNA，此法可获得100~200kb的DNA片段，适用于构建真核基因组文库，Southern blot分析。

【试剂】

1、组织细胞裂解液

100~200μg/ml 蛋白酶K

10mmol/L Tris－Cl（pH8.0）

0.1mol/LEDTA (pH8.0)

0.5% SDS

20 μg/mlRNase A

2、平衡酚（用0.5mmol/L Tris－Cl饱和，pH8.0），

3、氯仿/异戊醇（24：1v/v）

4、3mol/L乙酸钠（NaAc，pH5.2）

5、冷无水乙醇（AR）

6、70%乙醇（-20℃静置）

7、TE缓冲液（10mmol/L Tris－Cl、1mol/L EDTA (pH8.0)

细胞裂解液各成分的作用：

1、第一种50mmol/L Tris-HCl是缓冲液，保证细胞裂解时PH值也能稳定，Tris是一种有机碱。

2、第二种1.0 mmol/L EDTA是一种金属螯合剂。

3、第三种150 mmol/L NaCl是等渗体系电解质，用于协调细胞膜内外离子平衡。

4、第四种0.1% SDS是十二烷基硫酸钠，是一种表面活性剂和还原剂，有增溶作用。

扩展资料：

细胞裂解及方法简介：

细胞裂解是改变细胞通透性和活性的重要实验方法。主要分为化学法和机械法，前者比较温和，后者虽然产量高，但反应更剧烈，很有可能造成细胞中的DNA断裂。

裂解方法包括化学裂解、酶裂解和机械裂解。化学裂解和酶裂解通常是比较温和的方法，通常会很少使DNA 断裂。这两种方法(包括SDS 和溶菌酶处理等)提取纯化DNA中常用的方法。

机械裂解可以更均一的裂解细胞，同化学裂解相比，机械处理具有更高的裂解效率和更低的选择性。机械处理可以更剧烈和全面的裂解细胞，但也会造成DNA 的断裂。

异丙醇的作用是通过-OH的疏水作用使得RNA 或者DNA链中的亲水基团受到保护，等同于沉淀，但是这是个反应时发生在水相中，与前面的氯仿不矛盾。

氯仿的作用有多个方面，一是作为有机溶剂变性蛋白，使其沉淀并通过离心除去，同时也通过变性作用抑制RNase活性；二是RNA提取试剂中通常含有苯酚（Trizol主要成分就是苯酚，很多自己配试剂提的方法也用苯酚，抽提蛋白时也会用到苯酚），苯酚微溶于水，抽提烷之后水相里有痕量的酚，如果不除去会损伤核酸，需要通过氯仿把水相里参与的苯酚抽提掉；三是作为溶剂抽提样品中的一些脂溶性杂质（比如油脂、脂溶性色素等），起到一定除杂作用

通常氯仿里面会加少量异戊醇（1/25），减少蛋白质在变性过程中由于震荡产生的泡沫，影响后续操作，不过个人经验感觉加不加没什么太大区别，也许是我的样品里蛋白不多吧

异丙醇是沉淀核酸用的，作用和乙醇一样。只不过用量少一点，0.6V~1V就够了，不像乙醇沉淀需要至少2V，一般需要2.5倍体积。在水相很多，离心管容积有限，加不下太多乙醇的时候一般会用异丙醇沉淀。不过感觉效果不如乙醇，偶尔会有沉淀不出来东西的时候