反相色谱中，为什么出峰顺序是苯，甲苯，乙苯，联苯

要得到重复性较好的结果要注意以下方面：

1、仪器要好：仪器重现性较好，注意灯的能量；

2、试剂要好：流动相纯度很重要；

3、操作要好：手法要熟练；

4、环境要好：避免震动、温度较大波动。

液相色谱法原理：

液相色谱法的分离机理是基于混合物中各组分对两相亲和力的差别。根据固定相的不同，液相色谱分为液固色谱、液液色谱和键合相色谱。

应用最广的是以硅胶为填料的液固色谱和以微硅胶为基质的键合相色谱。根据固定相的形式，液相色谱法可以分为柱色谱法、纸色谱法及薄层色谱法。

按吸附力可分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和凝胶渗透色谱。近年来，在液相柱色谱系统中加上高压液流系统，使流动相在高压下快速流动，以提高分离效果，因此出现了高效（又称高压）液相色谱法。

扩展资料：

液相色谱法分类：

液固吸附色谱

高效液相色谱中的一种，是基于物质吸附作用的不同而实现分离。其固定相是一些具有吸附活性的物质如硅胶、氧化铝、分子筛、聚酰胺等。

液液分配色谱法

基于被测物质在固定相和流动相之间的相对溶解度的差异，通过溶质在两相之间进行分配以实现分离。根据固定相与流动相的极性不同，分为正相色谱和反相色谱。前者是用硅胶或极性键合相为固定相，非极性溶剂为流动相；后者是硅胶为基质的烷基键合相为固定相，极性溶剂为流动相，适用于非极性化合物的分离。

离子交换色谱法

基于离子交换树脂上可电离的离子与流动相中具有相同电荷的溶质离子进行可逆交换，依据这些离子对离子交换基具有不同的亲和力而实现分离。薄壳型离子交换树脂柱效高，主要用来分离简单的混合物；多孔性树脂进样容量大，主要用来分离复杂混合物。

2、其次，将甲苯和乙二醇这两种化合物滴在液相色谱分析板上，插入分析仪。

3、最后，等待分析仪传出结果即可。

正相是固定相极性大，反相是液相极性大，分离速度与极性关联最大，但是还关联到温度、柱压等等

不一定严格按相反顺序出，但某些样品的顺序肯定会变。

色谱书上有这样的例子。

正相和反相是根据固定相和流动相的极性差异定义的。

但分离的过程不只是按照极性大小出峰的。有很多因素综合作用。但是主要因素是极性大小，所以出来的结果一般符合上述规律，但有特殊。

大多数会反过来，但有的就不变，我以前做过一个样品，反相是甲苯123，正相是甲苯321，两个都是甲苯在最前面

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如果是这样的话不建议你这样做，最好是用流动相来溶解样品。因为甲醇对流动相来说属于弱极性溶剂，进样后易产生溶剂效应，倒致出峰变形或产生溶剂峰。

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反相高效液相色谱的固定相是非极性溶剂，常见的固定相是十八烷基键合硅胶，流动相是极性溶剂，常见的流动相是甲醇，乙腈。

反相高效液相色谱是由非极性固定相和极性流动相所组成的液相色谱体系，它正好与由极性固定相和弱极性流动相所组成的液相色谱体系（正相色谱）相反。

RP-HPLC的典型的固定相是十八烷基键合硅胶，典型的流动相是甲醇和乙腈。RP-HPLC是当今液相色谱的最主要的分离模式，几乎可用于所有能溶于极性或弱极性溶剂中的有机物的分离。 反相色谱法适于分离非极性、极性或离子型化合物，大部分的分析任务皆由反相色谱法完成。

扩展资料

反相高效液相色谱的原理：

在反相键合相色谱法中使用的是非极性键合固定相。它是将全多孔(或薄壳)微粒硅胶载体，经酸活化处理后与含轻基链(c4、C8、C18)或苯基的硅烷化试剂反应，生成表面具有烷基或苯基的非极性固定相。如共价结合到载体上的直链碳氢化合物正辛基等。

关于反相色谱的分离机理，吸附色谱的作用机制认为溶质在固定相上的保留主要是疏水作用，在高效液相色谱中又被称为疏溶剂作用。根据疏溶剂理论，当溶质分子进入极性流动相后，即占据流动相中相应的空间，而排挤一部分溶剂分子。

当溶质分子被流动相推动与固定相接触时，溶质分子的非极性部分或非极性因子会将非极性固定相上附着的溶剂膜排挤开，而直接与非极性固定相上的烷基官能团相结合(吸附)形成缔合络合物，构成单分子吸附层。

这种疏溶剂的吸附作用是可逆的，当流动相极性减少时，这种疏溶剂斥力下降，会发生解缔，并将溶质分子解放而被洗脱下来。

参考资料来源：百度百科-反相高效液相色谱

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并没有简单又有效的检测方法，最简单地，就要靠您鼻子的灵敏度了，不过，甲苯的气味相当地不大，这个，有点困难。