DNA的细胞化学试验中三氯乙酸的作用是什么
三氯乙酸是一些大分子的沉淀剂,如蛋白质、DNA等.
在Feulgen反应中设置对照组,用热的三氯乙酸处理固定后的样品,将样品中的DNA抽提去,因此能作为Feulgen反应的阴性对照.
具体的请参详《组织化学与免疫组织化学》邱曙东
在酸性条件下与蛋白质形成不溶性盐. 这样可以尽量保证细胞中蛋白质等有效成分的流失。 才会更有利于我们对细胞的研究。
三氯乙酸,有机化合物,又名三氯醋酸 ,无色结晶,有刺激性气味,易潮解 ,溶于水、乙醇、乙醚 。主要用于有机合成和制医药、化学试剂、杀虫剂。
由三氯乙醛与发烟硝酸共熔氧化而得,反应温度80~100℃。用硝酸或高锰酸钾氧化三氯乙醛、在碘或三氯化磷催化和光照下直接氯化乙酸可制得三氯乙酸。
扩展资料:
TCA与蛋白质在酸性条件下与蛋白质形成不溶性盐。作为蛋白质变性剂使蛋白质构象发生改变,暴露出较多的疏水性基团,使之聚集沉淀。
随着蛋白质分子量的增大,其结构复杂性与致密性越大,TCA可能渗入分子内部而使之较难被完全除去,在电泳前样品加热处理时可能使蛋白质结构发生酸水解而形成碎片,而且随时间的延长这一作用愈加明显。
在电泳时使用TCA对蛋白质样品的浓缩或除盐时,对于分子质量大的蛋白质,要慎重选择TCA.对小分子量蛋白质的浓缩,采用TCA时也有两点需要注意:一是用TCA沉淀后,尽量用丙酮彻底抽提TCA二是样品处理后要尽快进行电泳分析,以免发生聚集及断裂,造成结果分析的不准确。
参考资料来源:百度百科——三氯乙酸
有以下两种方法配制:
1、直接称取10gTCA,溶解至100ml水中即可。
2、在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解,即成100%三氯乙酸(TCA),再稀释到溶液体积的十倍即可。
扩展资料:
三氯乙酸的主要用途
用于有机合成和制医药、化学试剂、杀虫剂。
三氯乙酸在羊毛活性染料染色中的作用:
三氯乙酸加入到羊毛活性染料染色体对其上染百分率有较大提高,上染百分率达到95%以上,活性红B-3BF、活性红KN-5B、活性红KE-3B、活性红K-2BP的染色温度在90℃以上的染色效果更好。
随着时间的延长,普通活性染料染色羊毛效果不断提高,但染色保温时间不宜超过60min。
三氯乙酸作为羊毛染色助剂的最佳工艺为:在90℃条件下,三氯乙酸质量浓度2 g/L,染料用量2%(owf),保温60 min条件下染色,染色后未经皂洗的羊毛其耐皂洗牢度不佳,在后处理工艺方面需要更进一步的改进。
参考资料来源:百度百科-三氯乙酸
实验方法
1.临时装片的制备。
2.固定:70%乙醇,10m i n。
3. 70'C~90'C,5%三氯醋酸,15分
4.清水冲洗
5.染色:碱性固绿染色5m i n
6.清水冲洗
7晾干,镜检
利用碱性染料甲基绿和派洛宁处理细胞,可使其中的D N A和R N A呈现出不同的颜色,这种颜色上的差异是由D N A和R N A聚合程度的不同所引起。
实验方法一蟾蜍血涂片D N A和R N A的显示
1.制备蟾蜍血涂片:同上
2.固定:70乙醇,5m i n晾干
3.染色:甲基绿一派洛宁,10m i n
4.清水冲洗
5.分化:纯丙酮
6.镜检
碱性蛋白
1.临时装片的制备
2.固定:70%乙醇,10m in
3.70'C~90'C,5%三氯醋酸15分。
4清水冲洗
5.染色:碱性固绿染色5m i n
6.清水冲洗
7.风干,镜检
D N A和R N A
1.制备蟾蜍血涂片:同上
2.固定:70%乙醇,5m i n晾干
3.染色:甲基绿一派 洛宁,10m i n。
4.清水冲洗
5.分化:纯丙酮
6镜检
2、三氯乙酸可以以不同浓度使用,但最常用于中度剥脱。面部细微皱纹、表浅瑕疵和色素斑通常用三氯乙酸处理。三氯乙酸剥脱的结果通常不是戏剧性的,不象石炭酸那样显著持久。使用三氯乙酸时,通常需要使用多次,以获得理想效果。三氯乙酸剥脱的恢复时间较石炭酸为短。
3、石炭酸是最强的产生深层剥脱的化学溶液,主要用于处理病人面部粗糙的皱纹、皮肤斑块或因暴露于日光下造成的损伤或皮肤的癌前病变。由于石炭酸有时有皮肤漂白作用,所以病人皮肤的颜色是是否使用这一治疗方法的决定因素。石炭酸仅限用于面部,如颈部和身体其它部位使用时可形成疤痕。 1 z&c( X9 vQ. {( h
化学剥脱对颊部、前额和眼周的细微皱纹及口周的垂直皱纹特别有效。ɑ羟基酸剥脱时可引起刺疼、红肿、激惹和结痂。随着皮肤对治疗的适应,问题将逐步解决。在第一次就诊时,要告诉医师自己的愿望。对于可能存在的任何问题都要毫不犹豫的提出来,要求医师详细解释手术的过程和计划,包括它的危险和好处,恢复的时间和价格。如有疱疹史,应在术前告诉医师。
三氯醋酸与水1:1混合即可。
三氯乙酸,有机化合物,又名三氯醋酸 ,无色结晶,有刺激性气味,易潮解 ,溶于水、乙醇、乙醚。主要用于有机合成和制医药、化学试剂、杀虫剂。
由醋酸氯化后分离以氯乙酸母液作原料,硫磺粉为催化剂,在90-100℃条件下继续氯化,然后再结晶,即得。
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操作注意事项
密闭操作,局部排风。操作人员必须经过专门培训,严格遵守操作规程。建议操作人员佩戴导管式防毒面具,戴化学安全防护眼镜,穿防酸碱工作服,戴橡胶耐酸碱手套。远离火种、热源。工作场所严禁吸烟。
使用防爆型的通风系统和设备。避免产生粉尘。避免与氧化剂、碱类接触。搬运时要轻装轻卸,防止包装及容器损坏。配备相应品种和数量的消防器材及泄漏应急处理设备。倒空的容器可能残留有害物。
参考资料:百度百科-三氯醋酸
①在酸性条件下与蛋白质形成不溶性盐.
②作为蛋白质变性剂使蛋白质构象发生改变,暴露出较多的疏水性基团,使之聚集沉淀.
③随着蛋白质分子量的增大,其结构复杂性与致密性越大,TCA可能渗入分子内部而使之较难被完全除去,在电泳前样品加热处理时可能使蛋白质结构发生酸水解而形成碎片,而且随时间的延长这一作用愈加明显; 在电泳时使用TCA对蛋白质样品的浓缩或除盐时,对于分子质量大的蛋白质,要慎重选择TCA.对小分子量蛋白质的浓缩,采用TCA时也有两点需要注意:一是用TCA沉淀后,尽量用丙酮彻底抽提TCA二是样品处理后要尽快进行电泳分析,以免发生聚集及断裂,造成结果分析的不准确。