那些因素影响邻甲苯胺法测定血糖的显色反应

一，实验目的

掌握血糖的测定原理和方法；掌握血糖的正常范围及意义；熟悉调节血糖的激素对血糖浓度的影响。

二，实验原理

家兔动物实验。获取家兔注射激素前后的血液样本并对其；进行血糖测定。邻苯甲胺方法测定血糖浓度。

实验采取前后对照的方法，对家兔注射肾上腺素和胰岛素，并通过耳缘静脉采血，获取激素注射前后的血液样本，采用邻甲苯胺法处理样本，最终与标品比色得出结论。

1.调节血糖的激素有：胰岛素、肾上腺素、胰高血糖素、肾上腺皮质激素、生长素和甲状腺素等。胰岛素是体内唯一能使血糖降低的激素，其他激素均使血糖升高。

2.肾上腺素升高血糖的机制主要作用于肝细胞膜受体，通过cAMP-蛋白激酶系统激活肝磷酸化酶，同时抑制糖原合成酶，导致肝糖原分解加速。胰岛素降低血糖的机制是：降低肝细胞cAMP水平，从而抑制肝磷酸化酶，激活糖原合成酶，促进肝糖原的合成；胰岛素诱导糖酵解关键酶类的合成，阻遏糖异生关键酶的合成；胰岛素促进葡萄糖进入红细胞、肌肉等组织的异化扩散，促进糖的利用。

3.血液中的葡萄糖，在热的冰醋酸溶液中可脱水生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛（或称羟甲基糠醛）。后者在与邻甲苯胺缩合，生成蓝绿色的西夫式碱（Schiffbase）。其色泽的深浅与葡萄糖浓度成正比。与同样处理的标准葡萄糖溶液比色，即可求得待测血液中葡萄糖的含量。

三，实验材料

1.材料：家兔两只,刀片，草酸钠，小烧杯。

2.试剂：①肾上腺素(1mg／lml)②胰岛素(20单位／ml)③碘酒、消毒酒精④饱和硼酸溶液⑤邻甲苯胺-硼酸⑥5％ 三氯醋酸溶液⑦饱和苯甲酸溶液⑧标准葡萄糖贮存液⑨标准葡萄糖应用液

四，实验方法

1.取健康正常家兔一只，实验前饥饿14~16h左右，称体重。

2.耳缘静脉采血。小刀刮去耳缘的毛，用酒精棉球擦拭使其充血，再用干棉球擦干。 刀片划开耳缘静脉，使血液滴入成有足够草酸钠的小烧杯中，注意收集期间要不断地晃动烧杯防止血液凝固。采集完毕后干棉球压迫血管止血。

3.给家兔注射肾上腺素（0.5mg/只），半小时后同样方法采得血液。

4.缓缓放入洁净试管内，加5%三氯醋酸3.6ml，同时摇动使之充分混匀。3000rpm离心5min，制得无蛋白血滤液（上清液）。

5.取四支试管，分别加入2.5ml邻甲苯胺试剂。并向试管1加入1ml蒸馏水，试管2加入1ml标准葡萄糖应用液，试管3加入1ml注射激素前的血液的无蛋白滤液，试管4加入1ml注射激素后的血液的无蛋白滤液。

6.混匀后沸水加热8min，取出并用自来水冲洗试管使之冷却。而后置于722型分光光度计630nm比色，空白管校正零点。

7.表加试剂如下表：

ml

空白管

标准管

待测管甲（药前）

待测管乙（药后）

蒸馏水

1.0

―

－

－

标准葡萄糖应用液（1mg/ml）

－

1.0

－

－

无蛋白血滤液（药前）

－

－

1.0

－

无蛋白血滤液（药后）

－

－

－

1.0

邻甲苯胺试剂

2.5

2.5

2.5

2.5

同理，对家兔进行肾上腺素注射（剂量为5单位/公斤体重）并进行上述步骤，最终得出结果。

五，实验结果

据试验，在注射胰岛素实验中，家兔重量为2.95公斤，依照比例注射15单位的胰岛素。在注射肾上腺激素的实验中，家兔重量为2.90公斤，注射1mg的肾上腺激素。

血糖测定：（葡萄糖标准液浓度为5.50mmol/L）

空白管

标准管

注 射胰岛素前

注射 胰岛素后

注射肾上腺激素前

注射肾上腺激素后

血清/ml

-

-

0.02

0.02

0.02

0.02

葡萄糖标准液/ml

-

0.02

-

-

-

-

生理盐水/ml

0.02

-

-

-

-

-

酶酚混合液/ml

1.5

1.5

1.5

1.5

1.5

1.5

曝光值

0

0.135

0.363

0.116

0.315

0.508

由此得出：

注射胰岛素前血糖浓度为14.79mmol/L。

注射胰岛素后血糖浓度为4.73 mmol/L。

注射肾上腺激素前血糖浓度为12.83 mmol/L。

注射肾上腺激素后血糖浓度为20.70 mmol/L。

得出结论：注射胰岛素可有效的降低血糖。2．注射肾上腺素能使血糖上升。

六，讨论

实验中要注意如下问题：

1.采血及注射激素时，应尽量使家兔保持安静。家兔不安静的情况下，肾上腺素分泌增多，血糖浓度升高，对实验结果有影响。

2.采血后要及时分离出血浆，避免溶血。溶血时红细胞内糖类扩散到血浆中，会对实验结果有影响。

3.采血量要准确，不能采得太少不够实验需要的血量，也不能采得太多伤及家兔。

4.由于血细胞不断从血浆摄取葡萄糖加以利用，因此, 采血后及时进行检测，否则血糖浓度将逐渐降低。

胰岛素和肾上腺素 对家兔血糖浓度的影响 掌握血糖 (blood sugar) 的测定方法及 激素 (hormone) 对血糖浓度的影响。 了解血糖测定的临床意义。 实验目的与要求 机体的血糖水平受多种激素的调节而维持稳定 影响血糖的激素分为两类： 降低血糖的激素：胰岛素 (insulin) 升高血糖的激素：肾上腺素 (adrenaline) 、胰升糖素、 糖皮质激素和生长激素 血浆 (plasma) ：全血经抗凝处理后得到的液体成分， 含有凝血因子、纤维蛋白原等 血清 (serum) ：全血凝固后析出的液体， 不含纤维蛋白原 血 样 实 验 原 理 620 nm 测定待测血样的吸光度 (A) 与同样处理的葡萄糖标准溶液比较 ( 标准管法 ) 即可求得血样中葡萄糖的含量。 酸性、加热 -3 H 2 O 羟甲基糠醛 邻甲苯胺 醛亚胺（蓝色） 葡萄糖 (glucose) 邻甲苯胺法测定血糖浓度 2 、血样的采集 1 ）心脏内取血 5ml ，加入抗凝剂（草酸钠）【胰 -1 、肾 -1 】 2 ）皮下注射 胰岛素 0.5ml/kg （ 2U/kg ）， 1 小时后 1% 肾上腺素 0.4ml/kg ，半小时后 3 ）心脏内取血 5ml ，加入抗凝剂【胰 -2 、肾 -2 】 1 、动物的准备 家兔两只，禁食一晚。标记后，测量体重并记录。 实 验 步 骤 4 、邻甲苯胺法测定血糖浓度 1 ）取大试管，按 Page78 表格添加试剂 2 ）混匀各管，沸水浴中加热 10min 后取出，流水冷却。 3 ）用空白管校正吸光度零点，读取各管 620nm 的吸光度。 3 、血浆的制备 血样采集后， 2000rpm 离心 5min ，取上清。 数据 空白 对照 注射激素前 注射激素后 胰岛素组 胰 -1 胰 -2 肾上腺组 肾 -1 肾 -2 G 胰 -1 ＞ G 胰 -2

干化学葡萄糖氧化酶法：特异强、价廉、方法简单，是目前国内首选的测定血糖方法。其正常值：空腹全血为3.5-5.3毫摩尔/升（55-95毫克/分升），血浆为3.9-5.1毫摩尔/升（70-110毫克/分升）。 

干化学邻甲苯胺法：结果较可靠，由于血中绝大部分非糖物质及抗凝剂中的氧化物同时被沉淀下来，因而不易出现假性过高或过低。其正常值：空腹全血为3.3-5.5毫摩尔/升（50-100毫克/分升），血浆为3.9-5.4毫摩尔/升（70-115毫克/分升）。

扩展资料：

血糖的来源包括：

①食物消化、吸收；

②肝内储存的糖元分解；

③脂肪和蛋白质的转化。血糖的去路包括：

①氧化转变为能量；

②转化为糖原储存于肝脏、肾脏和肌肉中；

③转变为脂肪和蛋白质等其他营养成分加以储存。胰岛是体内调节血糖的血糖浓度的主要器官，肝脏储存肝糖元。此外，血糖浓度还受神经、内分泌激素的调节。

参考资料来源：百度百科-血糖

参考资料来源：百度百科-测血糖

破坏特定蛋白质可降血糖三磷酸腺苷是一种核苷酸，作为细胞内能量传递的“分子通货”，能储存和传递化学能，在核酸合成中具有重要作用。

葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化作用下，氧化生成葡萄糖酸并释放过氧化氢。过氧化氢在过氧化物酶和色原性受体的存在下释放氧，使色素原氧化成红色醌类化合物。在505nm处，醌的生成量与葡萄糖量成正比。

扩展资料：

原来用还原糖试剂(如邻甲苯胺)测定,现改进为用“真”糖试剂测定,如己糖激酶、葡萄糖6磷酸脱氢酶、葡萄糖氧化酶等从手工操作改进为半自动或自动测定。

因为邻甲苯胺对醛糖(如葡萄糖、半乳糖、木糖甚至抗坏血酸)均可有反应,并在酸性环境中产生绿色,因而可用比色法测定。但邻甲苯胺对葡萄糖并无特异性,而且酸性溶液对自动化测定的管道有破坏,故近年已逐步被淘汰。

参考资料来源：百度百科-血糖测定

实时血糖情况可以采空腹血清2ml，测葡萄糖（GLU）。如果要评估过去2-3个月的平均血糖水平，或用于糖尿病诊断和疗效观察，可以检测糖化血红蛋白（HbA1C），要使用EDTA抗凝管采血2ml。

市面上卖的床头的血糖仪也可以测血糖。