1.准备好预处理的样品，装入无菌均质袋中。2.打开均质器的门(可全开启)，将无菌均质袋开口部分在关上门时夹住。3.选择好程序(如拍击速度、拍击时间等)，开始拍击匀质工作;匀质完毕后，打开均质器的门，取出处理好的
食品微生物学检验大肠菌群计数：大肠菌群平板计数法（GB47893-2010）x0d一试剂和仪器x0d煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB肉汤）x0d结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）x0d恒温培养箱x0d自动稀释仪x0d均质器x0d振荡器x0d二样品处理x0d固体样品应在无菌条件下充分粉碎。本次演示以乳粉为例，取密封状态良好的试样，备用待测。x0d三检测过程x0d实验前准备x0d进入无菌操作室前应更换无菌实验服，戴帽子、口罩、无菌手套。进入无菌操作室后，首先用镊子夹取适量酒精棉全面擦拭双手，然后才能进行实验操作。x0d酒精易燃，因此在擦拭双手的过程中应离开酒精灯火焰一定距离，防止出现危险，待手上的酒精挥发完全后，再进行实验操作。x0d样品的稀释x0d取一洁净无菌均质袋于自动稀释仪上，用酒精棉充分擦拭样品袋，将剪刀置于酒精灯外焰上充分灼烧，小心剪开样品袋。将称样勺于酒精灯外焰灼烧片刻，准确称取25g样品于无菌均质袋中。用酒精灯外焰灼烧注水口片刻，在盛有样品的均质袋中注入225mL无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液。取下均质袋，将均质袋放入拍击式均质器中，用均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。x0d注意：样品匀液的pH值应在65～75之间，必要时可用1mol/L无菌氢氧化钠或1mol/L无菌盐酸溶液调节。x0d均质完毕后，做好标记，将均质袋置于样品框中。x0d在装有9mL生理盐水的无菌试管上做好标记，用1mL无菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入装有9mL生理盐水的无菌试管中，稀释前后试管口都应在酒精灯上灼烧片刻。加塞后于振荡器上混合均匀，制成1:100的样品匀液。同理，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。稀释样品时，注意吸管或吸头尖端不得触及稀释液面；每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管或吸头。x0d接种及培养x0d在事先经灭菌处理的培养皿底部做好标记。根据对样品污染状况的估计，选取2～3个适宜的连续稀释度。本次演示只做1:10和1:100的样品稀释液。x0d用无菌吸管吸取1:10样品稀释液1mL，加入到培养皿中，备用。同理，加入1:100稀释液和空白液。注意，每个稀释度应接种2个无菌培养皿，空白液即为以1mL生理盐水代替1mL样品稀释液。x0d加完样品梯度稀释液后，即可倾倒培养基。倾倒前应将锥形瓶的瓶口在酒精灯上充分灼烧。灼烧后及时倾注15mL～20mL结晶紫中性红胆盐琼脂于每个培养皿中，小心旋转培养皿，将培养基与样液充分混匀。倾注培养基时应将锥形瓶口尽量伸入培养皿内，防止倾倒时培养基挂在培养皿的内壁或外壁上，且倾倒过程应果断，防止培养基沿锥形瓶外壁流出、滴落。培养基的温度以46℃为宜，不能过高或过低，温度过高不利于操作且对菌体有害，温度过低培养基迅速凝固，菌体不能在培养皿内均匀的分布，导致菌落计数困难。转动培养基时用力须均匀，防止培养基沾到培养皿上盖或洒出。x0d倒完培养基后，静置培养皿，等待培养基冷却凝固。x0d待培养基凝固后，再加3mL～4mL结晶紫中性红胆盐琼脂覆盖平板表层。加两次培养基的主要目的是：使菌体均在培养基内部生长，以便于观察典型菌落形态。等待培养基冷却凝固。待培养基凝固后，翻转平板，置于培养箱中于36℃±1℃条件下培养18h～24h。x0d平板菌落计数x0d选取菌落数在15CFU～150CFU之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落，其中典型菌落的特征为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为05mm或更大。x0d证实实验x0d先在煌绿乳糖胆盐肉汤管上做好标注。将接种环置于红外灭菌器中灭菌，再用接种环从结晶紫中性红胆盐琼脂平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于煌绿乳糖胆盐肉汤管内，振摇均匀。每次接种后都应及时将接种环在灭菌器中灭菌。将接种完的煌绿乳糖胆盐肉汤管置于培养箱中，于36℃±1℃条件下培养24h～48h。培养完毕后，观察煌绿乳糖胆盐肉汤管中产气情况。凡管内倒管有气泡者，即可报告为大肠菌群阳性。
有均质器时，以无菌操作把25g或者25ml样品转移到无菌袋内，加入225ml稀释液，放在拍击式均质器内，拍打均质。制成1:10的稀释液；没有均质器时只能用手反复按无菌袋，使样品充分稀释均匀了。
检查方法：
1、外观检查：检查无菌均质器的外观，确保无菌均质器的外观完好，无损坏、破损等现象。
2、清洁度检查：检查无菌均质器的清洁度，确保无菌均质器的清洁度达到要求。
3、结构检查：检查无菌均质器的结构，确保无菌均质器的结构完好，无损坏、破损等现象。
4、功能检查：检查无菌均质器的功能，确保无菌均质器的功能正常，能够正常运行。
检查结果：
1、外观检查：无菌均质器外观完好，无损坏、破损等现象。
我的那本微生物的书上有,但是太多了我就偷懒一下,那个你先看看,若不行,我再翻书~
7 操作步骤
71 检样稀释及培养
711以无菌操作,取样25mL或25 g放入225mL灭菌生理盐水中,经充分振摇作成1：10均匀稀释液
固体检样在加入稀释液后,最好置均质器中以8000r/min～10000r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液
712 用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL,沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液),振摇试管,混合均匀,做成1∶100的稀释液
713 另取1mL灭菌吸管,按上条操作顺序,做10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次,即换用1支1mL火菌吸管
714 根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计,选择2～3个适宜稀释度,分别在做10倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度做两个平皿
715 稀释液移入平皿后,应及时将凉至46℃营养琼脂培养基(可放置于46±1℃水浴保温)注入平皿约15mL,并转动平皿使混合均匀同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照
716 待琼脂凝固后,翻转平板,置36±1℃温箱内培养48±2h
72 菌落计数方法
做平板菌落计数时,可用肉眼观查,必要时用放大镜检查,以防遗漏在记下各平板的菌落数后,求出同稀释度的各平板平均菌落总数
73 菌落计数的报告
731 平板菌落数的选择
选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准一个稀释度使用两个平板,应采用两个平板平均数,其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数,若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数平皿内如有链状菌落生长时(菌落之间无明显界线),若仅有一条链,可视为一个菌落；如果有不同来源的几条链,则应将每条链作为一个菌落计
732 稀释度的选择
7321 应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度,乘以稀释倍数报告之(见表1中例1)
7322 若有两个稀释度,其生长的菌落数均在30～300之间,则视两者之比如何来决定若其比值小于或等于2,应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数字(见表中例2及3)
7323 若所有稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例4)
7324 若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例5)
7325 若所有稀释度均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数报告之(见表1中例6)
7326 若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间,其中一部分大于300或小于30时,则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之
